检测步骤 (注意: 标准及样品最好做平行试验以增加准确度.)
1. 将所有试剂及样品置于室温下,用实验室级的水充满洗瓶。
2. 从铝箔袋中取出相应数量的微孔条,放入干燥剂并重新封好袋子以免微孔条受潮。
3. 吸取100ul标样或稀释的样品提取液到相应的微孔。每个样品使用一个新的吸头。每孔加50ul三聚氰胺HRP酶标记物。
4. 轻轻混合60秒,孵育30分钟。
5. 孵育完后,将微孔中的溶液倒入水槽中,用洗液完全充满微孔,震荡后倒掉,重复三次,总共洗板四次。
6. 在吸水纸上拍打,尽可能将水拍干。
7. 每孔加入100ul底物溶液。三聚氰胺 奶粉 检测快速ELISA试剂盒
8. 孵育20分钟。
9. 每孔加入100ul终止液。
10. 用酶标仪读取450nm下的吸光值。
结果分析
1. 半定量的结果可通过样品吸光值与标样吸光值的简单对比而获得:样品的颜色比标样的颜色浅则三聚氰胺的浓度比标样的浓度高, 样品的颜色比标样的颜色深则三聚氰胺的浓度比标样的浓度低。
2. 定量分析需要绘制以标样吸光值为X轴,以标样的浓度的log值为Y轴的曲线图。画一条穿过标样点的直线,样品的吸光值位于该直线上。样品的吸光值在Y轴上的对应点为样品的浓度。如果样品吸光值大于最小标样的吸光值,则样品的浓度<20 ppb;如果样品吸光值小于最大标样的吸光值,则样品的浓度>500 ppb。
检测极限
预计本试剂盒的最小检测极限为10ppb。
特异性
三聚氰胺检测试剂盒与三嗪类似物的交叉反应可用最低检测剂量(LLD,约为90%B/Bo)或用抑制50%的吸光值所需的剂量(50%B/Bo)表示。
化合物
LLD(ppb)
50%B/Bo (ppb)
三聚氰胺
10
400
三聚氰酸
40
>10,000
三嗪
>10,000
>10,000
三嗪二铵
0.1
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提供的产品有:
甲醇:色谱纯。
乙腈:色谱纯。
氨水:含量为25%~28%。
三氯乙酸。
柠檬酸。
辛烷磺酸钠:色谱纯。
三聚氰胺标准品
混合型阳离子交换固相萃取柱
微孔滤膜
高效液相色谱(HPLC)仪
分析天平
离心机
超声波水浴
固相萃取装置
氮气吹干仪
涡旋混合器
具塞塑料离心管
色谱柱:C8柱,250 mm×4.6 mm(i.d.),5 μm
C18柱,250 mm×4.6 mm(i.d.),5 μm
吡啶:优级纯。
衍生化试剂
酶标仪
三聚氰胺试剂盒